陰道內(nèi)檢不出DNA可能由樣本污染、采樣時(shí)間不當(dāng)、檢測(cè)技術(shù)限制、個(gè)體生理差異以及樣本保存不當(dāng)?shù)纫蛩匾稹?/p>
1、樣本污染：
陰道環(huán)境存在多種微生物和體液成分，若采樣過(guò)程中混入潤(rùn)滑劑、消毒劑或操作者皮屑等外來(lái)物質(zhì)，可能干擾DNA提取。性行為后殘留的精液、陰道分泌物或經(jīng)血也可能稀釋目標(biāo)DNA濃度。建議采用無(wú)菌器械采樣，避免接觸非目標(biāo)區(qū)域。
2、采樣時(shí)間不當(dāng)：
性行為后超過(guò)72小時(shí)采樣，男性脫落細(xì)胞會(huì)因陰道酸性環(huán)境降解。月經(jīng)周期影響陰道上皮細(xì)胞更新率，黃體期黏膜增厚可能包裹外來(lái)DNA。最佳采樣窗口為性行為后24小時(shí)內(nèi)，避開(kāi)經(jīng)期及排卵期黏液高峰期。
3、檢測(cè)技術(shù)限制：
常規(guī)PCR檢測(cè)對(duì)微量DNA敏感性不足，當(dāng)目標(biāo)DNA含量低于0.1ng/μl時(shí)可能出現(xiàn)假陰性。STR分型需要完整DNA鏈，降解樣本可能漏檢。新一代測(cè)序技術(shù)可提高低拷貝數(shù)DNA檢出率，但成本較高。
4、個(gè)體生理差異：
陰道pH值低于4.5時(shí)加速DNA水解，某些女性先天分泌溶菌酶等核酸酶活性較強(qiáng)。絕經(jīng)后黏膜萎縮、宮頸柱狀上皮外移等解剖變化影響細(xì)胞留存。糖尿病患者陰道糖原代謝異?？赡芨淖兙植棵富钚?。
5、樣本保存不當(dāng)：
常溫下陰道拭子DNA每小時(shí)降解約1%，未及時(shí)冷凍會(huì)導(dǎo)致STR位點(diǎn)丟失。反復(fù)凍融破壞DNA鏈完整性，甲醛固定劑會(huì)引起核酸交聯(lián)。應(yīng)采用專(zhuān)用保存液4℃運(yùn)輸，-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
提高檢出率需規(guī)范采樣流程：性行為后24小時(shí)內(nèi)由專(zhuān)業(yè)人員用尼龍拭子旋轉(zhuǎn)采集宮頸管及陰道后穹窿分泌物，立即置于干燥無(wú)菌管。檢測(cè)前可采用全基因組擴(kuò)增或Y染色體特異性引物富集技術(shù)。日常生活中避免陰道灌洗，檢測(cè)前48小時(shí)禁欲，補(bǔ)充維生素E可能改善黏膜細(xì)胞完整性。若涉及法醫(yī)學(xué)鑒定，建議聯(lián)合檢測(cè)多種生物標(biāo)記物以提高準(zhǔn)確性。
